دوشنبه, 27 خرداد 1398

بررسی مقایسه ای عملکرد و محتوای Sk های متفاوت در بیماری های قلبی

بررسی مقایسه ای عملکرد و محتوای Sk  های متفاوت در بیماری های قلبی

 

نویسندگان : میر قاسم قاسم زاده

بیمارستان فرمانيه – دفتر پرستاری

 

مقدمه:

دوزاژ عوامل حل کننده فیبرین مثل streptokinase می بایست به منظور بالا بردن کنش درمانی و جلوگیری از اثرات نا مطلوب  به دقت تحت کنترل قرار گیرند.

روش ها ونتایج: 16 فرآورده streptokinase در یک تجزیه عملکرد زیر پوستی chromogenic (رنگ دانه) به صورت طبیعی وکم شدن (SDS) Sodium dodecyl sulphate , (PAGE) Polyacrylamide gel electrophoresis , N-Terminal Sequencing مقایسه شده اند.

Streptokinase اولین داروی ترومبولیتیک و هم چنین بیش از 40 سال بعنوان یک درمان در انفارکتوس میوکارد حاد معرفی شده است. اکنون این عامل اصلی و پیشتاز حل کنند ه فیبیرین در درمان شرایط Thromboembolic به شمار می آید که  در سازمان بهداشت جهانی (WHO) در لیست داروهای ضروری جای دارد.

Streptokinase  یک گیلکو پروتئین 40 – 50 کیلو دالتونی است که بر شکستن بافت پپتید در پلاسمینوژن تاثیر می گذارد و پلاسمین فعالی تولید می کند که فیبرین های پلی مر را به منظور حل ترومبوز از هم جدا میکند. آزمایشات متعدد بالینی نشان داده است که انفوزیون داخل وریدی Streptokinase    در ارتباط با کاهش مرگ و میر بلند مدت و کوتاه مدت با داروهای کاذب  در بیماران انفارکتوس میوکارد حاد مقایسه شده اند. بعلاوه با کاهش مرگ و میر، درمان و معالجه با  Streptokinase راهی است موثر که باعث اقامتی کوتاهتر در بیمارستان می شود و نیاز به مراقبتهای ویژه را در مقایسه با درمانهای سنتی کاهش میدهد.

دوزاژ عوامل حل کننده فیبرین می بایست به دقت مورد کنترل قرار گیرند.

 

روش ها:

16محصول Streptokinase از یازده کارخانه متفاوت مورد آزمایش قرار گرفتند. همه محصولات در داروخانه های  برزیل، هندوستان، اردن، چین، پاکستان یا اروپا موجود بودند. داروخانه ها این داروها را تا زمان مصرف در دمای 2+ تا 8+ درجه نگهداری می کنند  در حالیکه اطمینان حاصل میکنند که تنها نمو نه های تجزیه شده برای عملکرد مشخص مورد استفاده قرار می گیرند و گرفتن نتایج مقایسه ای  را ممکن می سازند. پس از آن نمونه های تجزیه شده در دمای  15- تا 25- درجه نگهداری می شوند تا بررسی بعدی که به ترتیب توسط PAGE, SDS-PAGE که هر کدام از نمونه ها طبق عملکرد حقیقی معین خود در تجزیه رنگ دانه ای (Chromogenic) کمرنگ شده اند انجام می شود.

تعیین عملکرد Streptokinase

نمونه ها یStreptokinase به نسبت عملکرد  25-500 IU/ml (همانطور که بر برچسب عملکرد محصول قید شده است) در Phoshphate buffer PH 1/15µ  شامل  Bovine Serum Albumin 3% (w/v) می شود.                

عملکرد پلاسمین با اضافه کردن 30 کالیکرین خنثی کننده unit/ ml آپروتین متوقف شده است.

Cuvette شامل محلول رنگ دانه زیر پوستی می شود که به دقت با نمونه ها ی کمرنگ شده Streptokinase تکمیل شده اند.

افزایش جاذبه 405 nm در یک اسپکتروفومتر با نگهدارنده Thermostable Cuvette و Thermostat  در 3 دقیقه اندازه گیری شده است.

منحنی درجه بندی از حداقل 3 درجه با مرجع استاندارد منطبق بر 200IU/ml (20µl) ساخته شده است. عملکردهای نمونه ها از منحنی درجه بندی مشخص شده اند که استفاده از بالاترین جاذبه، ارزش آن را در مدت زمان 15 ثانیه افزایش می دهد. دوره نهفتگی و اندازه گیری در 25± 0.5˚c  به اجرا در می آید.

 

میزان خالصی نمونه ها و تعیین محتوا

در عملی ساختن  PAGE طبیعی و کاهش SDS-PAGE از یک محفظه الکتروفورز ІІ  کوچک قدرتمند استفاده می شود. Buffer های معمول 25mM Tris-HCL PH 8.3,  192mM glycine,  0.1%(w.v) SDS برای SDS بودند.

نمونه ها برای SDS- PAGE کاهش یافته شامل

63Mm Tris-HCL PH 6.8, 10%(V/V) glycerol, 2%(w.v) SDS, mg/ml dithiothreitol ,   and 0.0025% (w/v) bromopheno blue       می شوند.                                                          

نمونه ها توسط آب نسبت به غلظت 60 000 IU/ml رقیق(کمرنگ ) شده اند و سپس مخلوط شدند 1:1 (v/v) با نمونه buffer و به مدت 3 دقیقه جوشانده شدند.

ژل در ثابت سازی محلول ]3% اسید استیک و 25% اتانول[ با تکان دادن به آرامی در اتاق حرارت به مدت 30 دقیقه قرار گرفت.

 

N-Terminal Sequencing

ترکیب محصولات برجسته و مشهود Streptokinase در PAGE طبیعی توسط N-Terminal Sequencing بررسی شده است.

نمونه های مورد بررسی موضوع  PAGE قرار گرفتند.

 

 

 

 

نتیجه گیری

عملکرد محصولات متفاوت از 20.8 تا 107.4 قرار دارند که بر برچسب عملکرد هر محصول درج شده است.

برا ی خالصی محصولات طبیعی Streptokinase عملکرد از 42.6-107.4 به ثبت رسیده است. برای ترکیب دوباره , Streptokinase  Heberkinaseو STPase (دو گروه) میزان عملکرد اندازه گیری شده بر برچسب به ترتیب 23.3% و 20.8 می باشد.

میزان عملکردی ترکیب سازی دوباره SK چین قابل تعیین و تشخیص نبود زیرا در تجزیه رنگ دانه ای واکنش جنبشی غیر عادی نشان داد. فقط سه نوع Streptokinase بعنوان مثال Streptase , Kabikinase و  Likinase  دارای عملکرد بین 90-111% از ارزش اعلام شده بودند در حالی که باقی گروه های  Likinase  تنها با برچسب 53.1% عملکرد عرضه شده اند.          

 

 

References:

Tillet WS, Garner RL

Gross R, Hartle W,Kloss G et al

European society of cardiology